1. Sissejuhatus
Kaalium 4-metoksüsalitsülaat (4MSK), mille struktuur sarnaneb salitsüülhappega, on uus meditsiiniline valgendav koostisaine, mida kasutatakse kosmeetikas selle valgendava toime tõttu ja mis on tõhus kosmeetika koostisosa. Sellel on võime parandada nahatooni tasakaalu, leevendada liigset pigmentatsiooni, korrigeerida epidermise ebatüüpilist vohamist, soodustada melaniini eritumist ning vältida tedretähne ja laikude teket.

2. Peamised funktsioonid
Pigmentatsioon, tedretähnid ja selguse puudumine on paljude Aasia naiste probleemiks ning seetõttu pakuvad Aasia naistele nahka heledamaks muutvad tooted. Kaalium{0}}metoksüsalitsülaadi efektiivsust on uurinud juhtivad kosmeetikafirmad ja tulemused on näidatud allpool.
2.1. Melanogeneesi pärssimine
Hiire melanoomirakke (B16) kultiveeriti kolm päeva 4MSK juuresolekul ja puudumisel ning mõõdeti rakkude arv ja toodetud melaniini kogus antud arvu rakkude juures. Saadi rakkude arvu ja melaniini hulga suhe 4MSK juuresolekul melaniini kogusesse 4MSK puudumisel ning nii analüüsiti 4MSK mõju melanogeneesile.
Tulemused näitavad, et rakkude arv ja melaniini kogus pärast 3-päevast 4MSK lisamist on näidatud joonisel 2. Kinnitati, et 4MSK-l oli kontsentratsioonist sõltuv melanogeneesi inhibeeriv toime ning Williamsi testi tulemused leiti olema statistiliselt olulised 3 x 10-4 ja 10-3 mol/L lisamisklastrite puhul, võrreldes 4MSK lisamise puudumisega. Siiski ei leitud ühegi testitud 4MSK kontsentratsiooni puhul mingit mõju rakkude proliferatsioonile.

2.2. Kuraminidaasi aktiivsuse takistus
Türosinaasi aktiivsuse hindamiseks mitte-rakulistes süsteemides oli substraadiks L-DOPA ja selle metabolismist tulenevat dopakroomi produktsiooni määrati 475 nm neeldumistestiga.
Türosinaasi aktiivsuse impedantsi määr 4MSK poolt määrati, lisades ülaltoodud reaktsioonisüsteemile 4MSK lahuse ja lüsaadi ning jättes segu 90 sekundiks toatemperatuuril reageerima, saades 4MSK lahuse lisamisel testitud väärtuste suhte võrrelduna lüsaadi rühm.

2.3. UV-indutseeritud mõjude pärssimine keratinotsüütide diferentseerumisele
Vahetult pärast 3D-nahamudeli kiiritamist UV-valgusega lisati nahamudeli pinnale 4MSK lahus, inkubeeriti 30 minutit ja seejärel eemaldati 4MSK ja inkubeeriti 1 päev. 4MSK lahus asendati kontrolli eesmärgil lüüsisöötmega. Pärast inkubeerimist võetud nahamudelid värviti immunohistokeemiliste uuringute jaoks antitropiini antikehadega ja tropiini mRNA ekspressiooni kvantifitseerimiseks kiire RT-PCR (pöördtranskriptsiooni-polümeraasi ahelreaktsioon).
Antitrofoblastide antikehadega tehtud immunohistokeemiliste uuringute tulemusena oli kolmemõõtmeline nahamudel sarnane in vivo testiga, kusjuures granulaarse kihi läheduses oli trofoblasti valk, mis on diferentseerumise marker. Pärast selle nahamudeli ühepäevast inkubeerimist UV-kaevudes troponiini ekspressioon vähenes. 4MSK lisamine nahamudelile vahetult pärast UV-kiirgust pärssis märkimisväärselt UV-indutseeritud troponiini ekspressiooni vähenemist.
Lisaks näitas samast nahamudelist ekstraheeritud RNA kvantitatiivne PCR analüüs, et taurolitioneiini mRNA ekspressiooni vähenemine UV-kiirgusega kiiritatud rühmas oli 4MSK-ga lisatud rühmas alla surutud. Immunohistokeemiliste uuringutega kinnitatud tulemused ehk troponiini ekspressiooni vähenemine valgu tasemel ja 4MSK ekspressiooni languse allasurumine said kinnitust ka mRNA tasemel.

2.4 Inimese pigmentatsiooni kaitsev toime
Kaksteist tervet täiskasvanud meessoost vabatahtlikku eksponeeriti UVA ja UVB lainepikkustega neljas kõhupiirkonnas 3 päeva jooksul, kasutades kunstlikku UV-valgusallikat lMED-i (minimale erüteemi doos) ekvivalendiga üks kord päevas iga katsealuse kohta. Katseproovidena kasutati nelja kreemi, 1 protsenti, 3 protsenti, 5 protsenti 4MSK-d ja aluskreemi, mida kanti peale 3 korda päevas 7 päeva jooksul alates UV-kiirgusega kokkupuute algusest. Hüperpigmentatsiooni astme hindamiseks mõõdeti nahatooni enne ja pärast pealekandmist kaks korda värvitestriga ja keskmistati, et saada muutuse suurus enne ja pärast kokkupuudet, võrreldes piirkondi, kus kasutati erineva kontsentratsiooniga 4MSK kreeme, piirkondadega, aluskreemid said peale.
Uuritavatena kasutati kõiki 12 meessoost katsealust. Uuritavate keskmine vanus oli 38,4 aastat. Iga kasutuskoha L* väärtused enne katseartikli pealekandmist on näidatud tabelis-la. L* väärtusi analüüsiti igas katsekohas enne katseartikli pealekandmist ja kinnitati, et nahatoonis ei olnud enne testi alustamist kohtade vahel erinevusi.
ΔL väärtused iga katsekoha kohta enne katseartikli pealekandmist ja 7 päeva pärast pealekandmist on näidatud alloleval joonisel. Manustamiskoha ΔL 1 protsendi 4MSK kreemiga oli statistiliselt oluliselt väiksem kui aluskreemi manustamiskoha ΔL. Lisaks muutus ΔL 4MSK sisalduse suurenemisega järk-järgult väiksemaks, järeldades, et 4MSK-l on annusest sõltuv pigmentatsioonivastane toime. Lisaks ei täheldatud kogu katseperioodi jooksul nahaanomaaliaid, nagu turse, punetus või sügelev vähk.

2.5. Keratinotsüütide proliferatsiooni ja diferentseerumise tasakaalustamatuse parandamine ning melaniini sujuva vabanemise soodustamine
Uuringud melanotsüütidega on näidanud melanogeneesi olulist pärssimist kontsentratsioonil 3 x 10-4 mol/L, mis on täieliku potentsiaaliga võrreldes olemasolevate valgendavate toimeainetega. Uuringud melaniini tootmise pärssimise toimemehhanismi kohta ja selle kohta, kas melaniini tootmiseks vajaliku ensüümi kuraminidaasi aktiivsus on takistatud, on näidanud, et 4MSK mitte ainult ei inhibeeri melaniini tootmist, vaid omab ka kuraminidaasi aktiivsust pärssivat toimet.
On teada, et pigmentatsiooni peamine põhjus on UV-valgus, mis põhjustab keratiini moodustavates rakkudes diferentseerumismarkerite ekspressiooni mööduvat kõrvalekallet. Tuginedes meie järeldustele, et diferentseerumismarkeri tasakaalustamatus on krooniline isegi ilma UV-kiirguseta pigmentatsioonikohas, viisime läbi uuringu diferentseerumismarkeri normaliseerimise kohta 4MSK abil. Kasutades kolmemõõtmelist nahamudelit, oleme näidanud, et 4MSK-l on kaitsev toime keratinotsüütide diferentseerumise markeri tropomüosiini tasakaalustamata ekspressiooni vastu nii mRNA kui ka valgu tasemel.

Teiseks on in vivo testid kinnitanud, et 15 protsenti 4MSK-d sisaldaval katsetootel on kontsentratsioonist sõltuv kaitseefekt UV-pigmentatsiooni vastu. Nahaanomaaliaid ei täheldatud terve testiperioodi jooksul 4MSK-d sisaldava testtoote kasutamise tõttu, mis muudab 4MSK kosmeetilise koostisosana ohutuks ja efektiivseks.
In vitro uuringud on kinnitanud 4MSK otsest pärssivat toimet melanogeneesile ja selle mõju keratiini moodustavate rakkude proliferatsioonile ja diferentseerumisele. Mõlemal toimingul on kaitsev toime melaniini tootmisele ja vabanemisele, mis põhjustab liigset melaniini ladestumist nahas. In vivo testid on näidanud, et 4MSK on suurepärane kaitse UV-pigmentatsiooni vastu ja seetõttu arvatakse, et 4MSK on efektiivne ka pigmentatsiooni, tedretähnide ja tuhmumise vastu liigse naha melaniini näol.

3. Rakendused

Kaalium{0}}metoksüsalitsülaati kasutatakse peamiselt kosmeetikatoodetes.

4. Vooskeem

2,4-Dihüdroksübensoehape → lisage naatriumhüdroksiidi leeliseline vesilahus → lahustage → jahutage → → reguleerige pH-d → sadestage → tsentrifuugige → loputage → kuivatage → toores 4-metoksüsalitsüülhape → kuumutage → segage → ekstraheerige filter → kuivatage → puhas 4-metoksüsalitsüülhape → reguleerige pH-d → segage 3 → eraldage lahusti → jahutage kristallisatsioon → ekstrakti filter → toores 4-metoksüsalitsüülhape kaalium → lahustage toores → värvitu → ekstraktige filter → jahutage kristallisatsioon → vaakum kuiv → puhas 4-metoksüsalitsüülhape kaalium

5. Kvaliteedistandard

Enterprise Standardi järgi

Üksused	Tehnilised andmed	Tulemused
Välimus	Valge kuni valkjas pulber	Valge pulber
Identifitseerimine	HPLC, NMR, LC-MS	Vastab standardile
Raskemetallid	Vähem kui 20 ppm või sellega võrdne	<20ppm
Nagu	Vähem kui 2 ppm või sellega võrdne	<2ppm
Kaod kuivamisel	Vähem kui 0,5 protsenti või sellega võrdne	0,29 protsenti
Üksik lisand	Väiksem või võrdne 1.0 protsenti	Vastab
Analüüs (HPLC)	Suurem või võrdne 98.0 protsenti	98,56 protsenti